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走进细胞室——骨髓片常用的两组特殊化学染色
上回说到骨髓常规检验，今天终于轮到细说骨髓片的细胞特殊化学染色啦！
什么细胞特殊化学染色？细胞化学染色常用的有哪几种？都在什么情况下使用？用哪种方法呢？它们都有什么意义？
别急别急～接下来由小编一一为各位详细讲解。
什么是细胞化学染色？
从名字上看我们可以粗略的理解为用化学反应与细胞形态学利用两种方法的特性进行相互结合。
它以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理，对血细胞内的各种化学物质（酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。
我们通常会在送来初诊骨髓片的时候进行细胞化学特殊染色，因为细胞化学染色临床的应用价值其中一个是辅助判断急性白血病的细胞类型，另一个是辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断。
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常用的化学染色有四种：
1、髓过氧化物酶染色（POX)
2、过碘酸﹣希夫反应（PAS)
3、中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP)
4、铁染色
别看有四种那么多，但是他们都是两两配对组队的～POX和PAS为一组，NAP与铁染色为一组。
什么时候应用哪一组呢？我们染色之前都会对骨髓片镜检取材，初诊骨髓片的取材不单单是在低倍镜下寻找有没有骨髓小粒和巨核细胞那么简单噢，还要转至油镜看看各个细胞。
如果发现有许多原始细胞和早幼细胞，那么选择POX和PAS这一组进行染色。反之，如果出现许多大多数成熟细胞那么就选择NAP和铁染色这一组噢。
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第一组
髓过氧化物酶染色(POX)+过碘酸﹣希夫反应(PAS)
Step1:镜检发现大量的幼稚细胞
Step2:两张骨髓片进行POX+PAS染色
PAS染色步骤：
甲醛固定10min→吹干后过碘酸水浴10min→冲洗吹干后加雪夫试剂水浴30min→冲洗后加入苏木素15min
POX染色步骤：
I液1min→II液10min(用前配置：25ml蒸馏水＋8滴双氧水)→95%酒精脱色2min(脱色至无色为止)→吹干后进行瑞氏染色25min
Step3:染好片后进行镜检
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POX正常血细胞的染色反应
1、粒细胞系统：分化差的原粒细胞为阴性，分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞均呈阳性；且细胞越成熟，阳性反应越强。嗜酸性粒细胞阳性最强，嗜碱性粒细胞为阴性。
2、单核细胞系统：
大多数单核细胞系统的细胞呈阴性或弱阳性，阳性颗粒少而细小。
3、其他细胞：
淋巴细胞系统、红细胞系统及巨核细胞系统的细胞均呈阴性，浆细胞、组织细胞也呈阴性，吞噬细胞有的呈阳性。
POX临床意义：
帮助鉴别急性白血病的类型，如急性粒细胞白血病呈强阳性，急性单核细胞白血病呈弱阳性或阴性，急性淋巴细胞白血病呈阴性。
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PAS正常血细胞的染色反应
1、粒细胞系统：分化差的原粒细胞阴性，分化好的原粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性反应，且细胞越成熟，阳性反应越强。嗜酸性粒细胞中的嗜酸性颗粒本身不着色，而颗粒之间的胞质呈红色；嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒呈阳性，而颗粒之间的胞质不着色。2、单核细胞系统：分化差的原单细胞呈阴性，其他为阳性，绝大多数阳性呈细颗粒状，有时分布于细胞边缘的阳性颗粒较粗大。3、淋巴细胞系统：大多数淋巴细胞系统的细胞呈阴性，少数淋巴细胞呈阳性，呈粗颗粒状或块状。4、其他细胞系统：红细胞系统均呈阴性；浆细胞一般呈阴性，少数呈阳性，呈细颗粒状；巨核细胞系统的细胞(包括血小板)呈阳性，呈颗粒状或块状。巨噬细胞可为阳性，呈细颗粒状。
PAS临床意义：
帮助鉴别急性白血病的类型，急粒呈阴性或弱阳性，急淋呈原幼淋阳性呈粗颗粒状或块状，急单呈弥漫均匀或细颗粒状。同时还能进行红血病与巨幼贫鉴别，前者幼红细胞阳性，后者幼红细胞阴性。
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第二组
中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP)＋铁染色
Step1:镜检出现大量成熟细胞
Step2
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挑选两张骨髓片分别进行NAP与铁染色，值得一提的是，铁染色尽量挑选骨髓小粒较多的骨髓片，因为我们需要观察细胞外铁。
NAP染色步骤：
无水乙醇固定15min→基质液水浴5h（用前需要配置）→硝酸钴15min→水洗后硫化铵15min→水洗后伊红染5-10min
铁染色步骤：
酸化亚铁氰化钾溶液30min（用前配置）→水洗后片上加满水膜→沙*4滴混匀15min→冲洗
Step3:染好片后进行镜检
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NAP正常血细胞的染色反应
1、中性成熟粒细胞呈阳性反应，其他细胞基本呈阴性。
2、中性细胞碱性磷酸酶染色不但要看是否阳性还要看积分值。
NAP临床意义：
主要用于疾病鉴别诊断，慢粒与类白的鉴别为CML减低，类白增高。急性白血病的鉴别为AML减低，ALL增高。感染类型的鉴别为病*感染减低，细菌感染增高。
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铁染色正常血细胞的染色反应
1、细胞外铁
观察骨髓小粒中的铁，呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状。根据骨髓小粒中铁的存在方式及量将细胞外铁分为(-)、(+)、(++)、(+++)、(++++)。
2、细胞内铁
观察个中幼红和晚幼红细胞计算出铁粒幼红细胞的百分比。
铁粒幼红细胞是指胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞，根据蓝色铁颗粒多少、粗细分为：I型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及环形铁粒幼红细胞。
铁染色临床意义：
1．缺铁性贫血：其细胞外铁明显减低甚至阴性，细胞内铁阳性率减低或为零；经铁剂治疗有效后，其细胞外铁、内铁增多。
2．铁粒幼细胞贫血：铁粒幼红细胞增多，其中的环形铁粒幼红细胞增多，细胞外铁也常明显增多。
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以上就是骨髓检查时常用的四种特殊染色~
最后的最后，小编在此总结一下，一般骨髓细胞形态学检查初诊片需要进行特殊染色，特殊染色常用有四种并组成两组：
第一组为POX与PAS：取材观察发现大量幼稚细胞则进行这组染色；
第二组为NAP与铁染色：在取材时镜下观察到更多的成熟细胞则进行这组染色。
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供图｜李嘉雨、凌小婷
供稿｜凌小婷、莫莉筛
编辑｜李嘉雨
审核｜*一芳
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